微小RNA-29b通过靶向调节Tribbles假激酶2的表达促进结直肠肿瘤的衰老

作者：侯振林; 王桂华; 胡俊波; 王晶; 孙黎^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, 36(12): 2203-2206.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.12.023

• 微小RNA-29b
• Tribbles假激酶2
• 结直肠癌
• 细胞衰老

目的探讨结直肠肿瘤中微小RNA(miRNA, miR)-29b对Tribbles假激酶2(TRIB2)调节的机制。方法利用网上在线数据库分析潜在结合TRIB2的3’端非编码区(3’UTR)的miRNA, 选取其中评分最高的miR-29b进行研究;利用真核细胞转染技术, 干扰结直肠肿瘤细胞中miR-29b的表达;蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组细胞中TRIB2的蛋白及mRNA表达差异;利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-29b结合在TRIB2-3’UTR上的具体位置;β-半乳糖苷酶染色法检测miR-29b对结直肠肿瘤细胞衰老的影响。统计学分析均应用SPSS 24.0软件进行, 两组间统计学差异通过双尾t检验进行分析。结果在结肠癌细胞株中过表达miR-29b后, 与对照组比较, TRIB2的mRNA水平下降至(63.468±4.154)%和(43.145±7.523)%(t=5.351, P<0.01和t=6.074, P<0.01);转入针对miR-29b的inhibitor后, TRIB2的mRNA水平则升高至(205.033±27.070)%和(233.353±18.649)%(t=4.663, P<0.01和t=9.411, P<0.01)。与上述结果一致, 转入miR-29b则抑制, inhibitor则上调TRIB2的蛋白水平。而在结肠癌细胞中过表达miR-29b后, 野生型TRIB2-3’UTR质粒的荧光素酶活性分别下降至(53.531±3.787)%和(45.051±1.728)%(t=6.928, P<0.01和t=15.570, P<0.01), 而突变型TRIB2-3’UTR质粒的荧光素酶活性只有轻微下降[下降至(87.366±3.825)%和(92.839±3.171)%, t=5.578, P<0.01和t=2.245, P>0.05]。过表达miR-29b后, 结肠癌细胞中衰老的细胞比例从41.473%升高至62.085%(χ2=19.731, P<0.01), 同时过表达TRIB2后, 则下降至46.866%(χ2=12.031, P<0.01)。结论 miR-29b可靶向调控TRIB2的表达, 促进结直肠肿瘤的衰老。

• 单位
  华南肿瘤学国家重点实验室; 华中科技大学同济医学院附属同济医院; 中山大学肿瘤防治中心; 基础医学院