沉默信息调节因子1受抑制导致肝细胞脂类代谢紊乱促进丙型肝炎病毒复制

作者：孙丽杰; 赵勇华; 李树臣; 于建武; 康鹏; 刘伟

来源：中华肝脏病杂志, 2013, 21(11): 834-839.

• 肝炎病毒,丙型
• 沉默信息调节因子1
• 脂肪酸合成
• 脂肪酸氧化

目的用携带HCV复制子的Huh-7.5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及肝细胞脂类代谢的影响。方法实验分为Huh-7.5细胞、复制子细胞和干扰素处理的复制子细胞3组。应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧(ROS)变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)~+/NADH比值变化。应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR(RT-PCR)、Western blot检测SIRT1活性、mRNA及蛋白的表达。RT-PCR检测SIRT1下游调节脂类代谢基因的mRNA水平。试剂盒检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)的含量,液体闪烁计数仪检测脂肪酸β氧化速度,Western blot检测HCV非结构蛋白5A表达水平。计量资料两组间比较用t检验,三组间比较用单因素方差分析。结果与Huh-7.5细胞相比,复制子细胞ROS水平增加(3.8±0.5与1.0±-0.2,t=12.736,P<0.01),NAD~+/NADH比值下降(0.03±0.01与0.12±0.03,t=6.971,P<0.01)。与Huh-7.5细胞和IFN处理的复制子细胞相比,复制子细胞SIRT1的活性下降(0.3±0.1与1.0-0.2、0.9±0.2,F=6.766,P<0.01)、mRNA水平下降(0.4±0.1与1.0±0.3、0.9±0.2,F=5.864,P<0.01)和蛋白水平下降(0.3±0.1与0.8±0.2、0.9±0.2,F=5.419,P<0.01);叉头蛋白转录因子(FoxO1)磷酸化水平下降(0.2±0.1与0.5±0.1、0.6±0.2,F=4.534,P<0.05),固醇调节元件结合蛋白-1c基因表达水平上升(1.8±0.4与1.0±0.3、0.9±0.3,F=4.091,P<0.05),而TG(F=6.670,P<0.01)和TC(F=5.789,P<0.01)合成增加;过氧化物酶体增殖物活化受体α基因表达水平下降(0.4±0.1与1.0±0.3、0.9±0.3,F=5.897,P<0.01),脂肪酸β氧化速度下降(0.4±0.1与1.0±0.3、0.9±0.3,F=5.123,P<0.01)。与未处理或SIRT1激动剂处理组相比,SIRT1抑制剂处理复制子细胞72h后HCV非结构蛋白5A表达水平明显增加(1.90±0.45与1.0±0.15、0.20±0.06,F=13.765,p<0.01)。结论HCV复制降低NAD~+/NADH比值,下调SIRT1活性及表达,改变其下游调节脂类代谢相关基因表达,增加脂肪酸合成,降低脂肪酸氧化,导致肝细胞脂类代谢紊乱,促进HCV复制。

• 单位
  哈尔滨医科大学附属第二医院