mdr1启动子驱动的CD-TK双自杀基因载体对耐药K562细胞的体外靶向杀伤作用

作者：王向玲; 纪春岩; 马道新; 赵建强; 侯明; 余海青; 臧绍蕾

来源：中华血液学杂志, 2006, (11): 757-761.

DOI：10.3760/j:issn:0253-2727.2006.11.009

• 基因,mdr1
• 自杀基因
• 基因治疗
• K562细胞

目的构建多药耐药基因(mdr1)启动子控制的胸苷激酶-胞嘧啶脱氨酶(CD-TK)双自杀基因真核表达载体,研究其对耐药白血病细胞K562／A02的靶向杀伤作用。方法利用分子克隆技术构建pcDNA3-mdr1 P-CD-TK真核表达载体,脂质体介导法转染K562、K562／A02细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞株。用PCR、RT-PCR鉴定TK、CD基因的稳定转染与表达,加用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)、5-氟胞嘧啶(5-FC)培养4 d,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建了mdr1启动子控制的CD-TK双自杀基因真核表达载体,脂质体成功转染细胞后,经C418筛选获得稳定转染细胞株。PCR结果显示,CD、TK基因均稳定存在于K562、K562／A02细胞中,RT-PCR结果显示K562／A02-CD-TK细胞有CD、TK基因特异性条带表达,而K562-CD-TK细胞无特异性条带。加入GCV、5-FC后,与K562-CD-TK细胞相比,K562／A02-CD-TK细胞存活率明显降低(在60μg／ml(GCV和600μg／ml 5-FC联合作用后两种细胞存活率分别为85．04％和41．13％)(P<0．05),凋亡率明显升高(同样浓度下分别为2．93％,10．27％)。结论mdr1启动子驱动的CD-TK双自杀基因系统可以靶向杀伤多药耐药的白血病细胞。

• 单位
  山东大学齐鲁医院