氯化钴通过诱发DNA氧化损伤抑制猪卵泡颗粒细胞增殖的研究

作者：魏甲园; 邾倩; 杨亚星; 申明^*

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(09): 2982-2992.

• 氯化钴
• 化学缺氧
• 猪卵泡颗粒细胞
• 细胞增殖
• DNA氧化损伤

旨在探究氯化钴(CoCl2)诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料，使用化学性低氧模型诱导剂CoCl2处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型。前期研究已确定CoCl2最适处理浓度，用200μmol·L-1 CoCl2处理猪卵泡颗粒细胞12 h,将培养出的传代细胞分成4组处理，分别为：对照组、CoCl2诱导缺氧处理组、GSH处理组、GSH+CoCl2联合处理组。对照组为完全培养基培养12 h, CoCl2诱导缺氧处理组给予终浓度200μmol·L-1 CoCl2的培养基培养12 h,单独GSH处理组加入浓度为2 mmol·L-1的GSH处理12 h, GSH+CoCl2联合处理组加入200μmol·L-1 CoCl2和2 mmol·L-1的GSH联合处理细胞后培养12 h。12 h后检测各组细胞增殖活性、ROS水平、γH2AX蛋白活性水平和Oxo-8-G水平。采用CCK-8法检测其增殖活性；采用双氯荧光素(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate, DCFH-DA)检测ROS水平；Western blot检测γH2AX蛋白活性水平，采用FITC荧光小鼠单克隆抗体检测Oxo-8-G水平。为了进一步明确CoCl2诱导的颗粒细胞增殖阻滞与DNA氧化损伤的关系，本试验在CoCl2处理的基础上添加抗氧化物GSH处理12 h后检测细胞增殖、ROS水平、DNA氧化损伤等相关指标。与对照组相比，200μmol·L-1 CoCl2处理猪卵泡颗粒细胞后，细胞增殖活力极显著降低(P<0.000 1),缺氧组ROS水平极显著升高(P<0.000 1),γH2AX蛋白表达极显著升高(P<0.000 1),Oxo-8-G水平极显著升高(P<0.000 1)。与缺氧组相比，在CoCl2处理基础上添加GSH后，ROS、Oxo-8-G、γH2AX水平极显著降低(P<0.000 1),并伴随细胞增殖活性的显著恢复(P<0.000 1)。CoCl2可抑制猪卵泡颗粒细胞增殖活性，机制与诱导DNA氧化应激损伤有关。

• 单位
  南京农业大学; 动物科技学院