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摘要
目的：研究黄芩素介导黏着斑激酶(FAK)调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和迁移的作用和可能的分子机制。方法：使用黄芩素(0、5、15、25、50μmol·L-1)处理胃黏膜上皮GES-1细胞、胃癌HGC-27细胞48 h，噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度黄芩素干预对FAK、上皮细胞-间质转化(EMT)及PI3K信号通路相关蛋白表达情况。利用慢病毒转染技术，构建稳定过表达FAK的胃癌HGC-27细胞，Western blot及绿色荧光蛋白(GFP)荧光检测FAK转染情况。细胞分为空载体组、黄芩素组、FAK过表达组和黄芩素处理FAK过表达组；MTT比色法检测细胞增殖活力；平板克隆形成实验观察克隆形成能力；Transwell迁移实验检测细胞迁移能力；Western blot检测EMT及PI3K信号通路相关蛋白表达情况。结果：与空白组比较，黄芩素(15、25、50μmol·L-1)组可明显抑制胃癌HGC-27细胞的增殖(P<0.05,P<0.01)，并呈剂量依赖性，而对胃黏膜上皮GES-1细胞则未见明显抑制作用，黄芩素(5,15,25μmol·L-1)还可下调磷酸化(p)-FAK蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。慢病毒转染HGC-27细胞后，与空载体组比较，FAK过表达组中FAK蛋白的相对表达量明显升高，GFP荧光拍照显示空载体组和FAK过表达组中HGC-27细胞均带有绿色荧光。MTT比色法、平板克隆形成实验及Transwell迁移实验检测结果显示，与空载体组比较，黄芩素组对HGC-27细胞的增殖、克隆形成和迁移具有抑制作用，FAK过表达组促进胃癌细胞的增殖、克隆形成和迁移能力。与FAK过表达组比较，使用黄芩素处理FAK过表达组则会抑制FAK增强的细胞增殖和迁移能力(P<0.05)。与空白组比较，黄芩素(15、25μmol·L-1)可明显上调胃癌HGC-27细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达，下调波形蛋白(Vimentin)、Snail、p-PI3K和p-Akt蛋白表达(P<0.05,P<0.01)；与空载体组比较，FAK过表达组细胞E-cadherin蛋白表达下调，p-FAK、Vimentin和Snail蛋白表达上调，且p-FAK/FAK、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt明显增加(P<0.05)，加入黄芩素处理后这一现象会被逆转。结论：黄芩素可介导FAK调控PI3K/Akt信号通路影响胃癌HGC-27细胞的增殖和迁移进程。
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