沙眼衣原体pORF5稳定转染HeLa细胞后宿主蛋白转录谱分析

作者：戴文婷; 何战胜; 粟盛梅; 周洲; 陈超群; 李忠玉

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2017, 37(01): 6-13.

• 沙眼衣原体
• pORF5基因
• 同位素标记相对和绝对定量
• 蛋白质组学技术
• 差异蛋白质

目的分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5基因对HeLa细胞蛋白质表达谱的影响,为深入研究Ct致病机制提供实验依据。方法构建pORF5基因慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染293T细胞包装慢病毒颗粒,收集慢病毒后感染HeLa细胞,流式细胞术多次分选获得pORF5基因稳定转染的HeLa细胞系(pORF5-HeLa细胞系)和对照HeLa细胞系。采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合二维液相色谱串联质谱(2DLC-MS/MS)技术建立pORF5-HeLa细胞和对照HeLa细胞蛋白质表达谱,筛选并构建差异蛋白质表达数据库,采用qRT-PCR和Western blot方法对部分差异蛋白质进行验证。结果成功建立了稳定过表达pORF5基因的HeLa细胞系和对照细胞系;采用iTRAQ结合2D LC-MS/MS质谱技术共鉴定了314个差异表达的宿主蛋白质,其中有159个蛋白质表达上调,155个蛋白质表达下调。差异蛋白质主要涉及代谢过程、免疫应答、生物黏附等众多事件。pORF5基因转染的Hela细胞中组蛋白川.2C(HIST1H1C)、血红蛋白α亚基(HBA1)、帕金森蛋白(PARK7)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、HMGB2的mRNA表达水平上调,而胞内氯离通道蛋白1(CLIC1)、细胞角蛋白7(KRT7)、SFN(14-3-3σ)、周期素依赖性刺激抑制因子2A(CDKN2A)的mRNA表达水平下调,Western blot证实PARK7、HMGB1蛋白表达水平增加,这些结果均与蛋白质组学结果一致。结论成功构建了pORF5基因稳定转染HeLa细胞的差异蛋白质表达谱,发现了一组受pORF5基因调控并与细胞代谢、增殖和黏附等生物学过程相关的差异表达蛋白质。提示pORF5可能通过改变宿主蛋白质的表达,影响宿主细胞生物学行为以促进Ct的生长发育。

• 单位
  南华大学