基于外泌体miR-30转运探讨益肾解毒法对尿毒症小鼠心肌自噬的作用

作者：童梦瑶; 江坚青; 罗富里^*; 晏子友

来源：广州中医药大学学报, 2023, 40(07): 1749-1758.

DOI：10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2023.07.026

• 益肾解毒法
• 尿毒症
• 外泌体
• miR-30
• 心肌自噬
• 小鼠

【目的】基于循环外泌体(Exos)miR-30转运探讨益肾解毒法对尿毒症小鼠心肌自噬的作用。【方法】(1)建立5/6肾切除尿毒症小鼠模型，采用益肾解毒法中药复方(YSJD,8.0 g·kg-1·d-1)灌胃治疗3周后，通过超声系统评估小鼠心脏功能，采用苏木素-伊红(HE)染色法观察心脏组织病理学形态，Masson三相染色法评估心脏纤维化含量，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)活性，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡，免疫组织化学法检测心脏组织中LC3蛋白表达情况，透射电镜(TEM)观察心肌超微结构。(2)分离小鼠外周血Exos，与小鼠原代心肌细胞共培养，采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡，免疫荧光染色法检测心肌细胞LC3表达，实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测Exos中miR-30表达，采用Western Blot法检测心肌细胞中自噬相关蛋白表达。【结果】益肾解毒法治疗可明显防止尿毒症心肌病(UCM)诱导的心脏功能障碍、心脏形态变化和重塑，降低血清CK-MB和LDH水平，抑制UCM小鼠心肌细胞凋亡，抑制自噬囊泡形成和自噬标记蛋白LC3的表达。从各组外周血中分离Exos，并通过RT-qPCR证实UCM+YSJD组Exos中miR-30表达较UCM组显著下调(P<0.001)。当在UCM+YSJD-Exos与原代心肌细胞共培养系统中向心肌细胞转染miR-30时，心肌细胞的凋亡率、自噬体形成和自噬相关蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。【结论】益肾解毒法可通过干预外周血Exos中miR-30转运抑制UCM诱导的心肌细胞凋亡、自噬，发挥心脏保护作用。

• 单位
  江西中医药大学第二附属医院; 江西中医药大学附属医院