无细胞百白破联合疫苗腺苷酸环化酶毒素液质联用定量检测方法的建立和应用

作者：卫辰; 吴燕; 蔡心怡; 晁哲; 王丽婵^*; 马霄^*

来源：微生物学免疫学进展, 2022, 50(01): 22-29.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2022.01.004

• 无细胞百白破联合疫苗
• 腺苷酸环化酶毒素
• 质量控制
• 液相色谱串联质谱

目的 建立不同工艺配方的无细胞百白破联合疫苗(diphtheria, tetanus and acellular Pertussis combined vaccine, DTaP)中腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin, ACT)的液质联用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)定量检测方法。方法 对百日咳疫苗精制液、原液、DTaP成品和ACT参考品进行酶解前处理，采用BioC18 (2.1 mm×150 mm, 3μm)为固定相，0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,多反应监测模式(multiple reaction monitoring, MRM)对特定离子对进行检测。以ACT参考品建立标准曲线，对样品中的ACT准确定量，并对方法进行验证及初步应用。结果 肽段ITGDAQANVLR特异性良好，在1.25～31.25μg/mL范围内线性良好(R2>0.99),残差平方和为2.55,不同基质稀释标准曲线的残差平方和分别为3.08和1.32,基质效应较弱。DTaP成品回收率为80%～109%、原液回收率为93%～121%、精制液回收率为112%～120%;进样精密度为2.32%;中间精密度<20%,具备较好的准确性、精密度，且不同型号仪器的系统适用性研究结果一致。将该方法用于检测4个厂家的无细胞百白破联合疫苗多个工序段含有百日咳疫苗的样品，其中2个厂家的样品均有ACT检出，且ACT在共纯化阶段不断富集达100～250倍，另2个厂家产品仅在发酵液和盐析液中检出。结论 建立的LC-MS/MS检测方法准确性和精密度都比较好，基质效应弱，可用于DTaP中ACT的定量检测和工艺过程监测。

• 单位
  中国食品药品检定研究院; 武汉生物制品研究所有限责任公司