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摘要
为探究DREB1A基因在新疆野生核桃响应低温胁迫中的作用及表达特性，以新疆野生核桃群体中的‘小矩圆’类型为试验材料，根据同源克隆的方法得到 JfDREB1A基因的cDNA全长序列，利用荧光定量PCR检测其在低温胁迫条件下的表达水平；将该基因片段重组到pET-28a(+)原核表达载体上，转化到大肠杆菌(DE3)感受态细胞中诱导表达。结果表明，获得了新疆野生核桃中的DREB1A,将其命名为 JfDREB1A,该基因的开放读码框长度为645 bp,具有典型的DREB1/CBF转录因子结构特征，JfDREB1A蛋白与其他植物DREB1蛋白具有高度保守性，与核桃亲缘关系最近。RT-PCR分析显示在4℃低温胁迫下， JfDREB1A基因的表达量迅速上调，8 h时达到最大。成功构建了pET-28a-JfDREB1A重组表达质粒，得到大小约为29 ku的融合蛋白，与预测蛋白大小相符，该蛋白在大肠杆菌中最佳诱导条件是诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导2 h。
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