高压注射FLT3L-hIgGFc表达质粒诱导小鼠体内树突状细胞扩增的研究

作者：卢信良; 王盛典; 任欢

来源：国际免疫学杂志, 2015, 38(02): 99-104.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2015.02.001

• FLT3L
• 树突状细胞
• 高压注射

目的构建重组真核表达质粒PTT3-FLT3L-hIgG Fc,鉴定其诱导机体表达蛋白FLT3LhIgG Fc的水平以及诱导小鼠淋巴结脾脏树突状细胞(DCs)的功能,探索体内注射质粒代替注射蛋白诱导DCs方法的可行性。方法用PCR方法从小鼠肥大细胞P815细胞系中扩增出FLT3L基因片段,连接到PTT3-hIgG Fc载体上,得到重组真核表达质粒PTT3-FLT3L-hIgG Fc;通过酶切鉴定和测序检测目的基因核苷酸序列;尾静脉高压注射PTT3-FLT3L-hIgG Fc质粒和PTT3-hIgG Fc对照质粒,9 d后取小鼠淋巴结和脾脏,流式细胞术检测CD3、CD19、DX5、CD11c、MHC-Ⅱ等的表达来鉴定DCs的比例和数量。结果酶切和测序结果显示PTT3-FLT3L-hIgG Fc质粒构建成功。小鼠尾静脉高压注射PTT3-FLT3L-hIgG Fc后,血清中持续含有高于生理水平的FLT3L-hIgG Fc蛋白,小鼠脾脏体积明显增大,淋巴结和脾脏中CD11c+MHC-Ⅱ+DC明显增多。结论成功构建了PTT3-FLT3L-hIgG Fc重组真核表达质粒,通过尾静脉高压注射方法证明该质粒确实有诱导小鼠体内DCs增多的功能,并且给小鼠注射质粒诱导DCs的效果与注射蛋白的效果接近。提示PTT3-FLT3L-hIgG质粒可代替FLT3L蛋白进行实验,为生产用于小鼠体内研究的FLT3L蛋白提供了指导。

• 单位
  中科院生物物理研究所; 哈尔滨医科大学