微小RNA-374a-5p靶向调控SRCIN1及对骨肉瘤细胞迁移、侵袭的影响

作者：龚敏勇; 熊超; 廖立潇

来源：临床肿瘤学杂志, 2020, 25(11): 975-981.

• 骨肉瘤
• 微小RNA-374a-5p（miRNA-374a-5p）
• 侵袭
• 迁移
• SRC激酶信号抑制剂1（SRCIN1）
• Wnt/β-连环蛋白信号通路

目的探讨微小RNA-374a-5p(miR-374a-5p)对SRC激酶信号抑制剂1(SRCIN1)的靶向调控作用及对骨肉瘤(OS)细胞迁移、侵袭和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测人正常成骨细胞h FOB 1.19及OS细胞(HOS、Saos-2、MG-63和U2OS)的miR-374a-5p水平。脂质体法向U2OS细胞转染miR-374a-5p抑制物(Inhibitor组)和无关对照序列(NC组),并设未转染细胞为对照组,q PCR、MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测miR-374a-5p水平、细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,q PCR和Western blotting检测SRCIN1、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Wnt1和β-catenin水平。通过生物信息学和双荧光素酶报告实验鉴定miR-374a-5p的靶基因。结果 OS细胞的miR-374a-5p水平均高于h FOB 1.19细胞(P<0.05)。Inhibitor组转染24、48 h后的增殖活力均低于其余两组(P<0.05)。Inhibitor组的miR-374a-5p水平、划痕愈合率和穿膜细胞数分别为0.327±0.062、(30.893±4.287)%和(140.390±13.598)个,均低于对照组的1.021±0.116、(77.339±5.130)%和(363.922±24.411)个及NC组的1.028±0.142、(75.019±3.670)%和(351.381±19.872)个(P<0.05)。与其余两组相比,Inhibitor组的SRCIN1水平升高,而MMP-9、Wnt1和β-catenin水平降低(P<0.05)。在线Target Scan预测显示,miR-374a-5p能够与SRCIN1的3’端非翻译区结合,miR-374a-5p模拟物和野生型SRCIN1质粒共转染细胞的相对荧光强度较其他转染组合降低(P<0.05)。结论异常高水平的miR-374a-5p在OS中发挥致癌作用,miR-374a-5p可能通过靶向SRCIN1激活Wnt/β-catenin通路,进而促进OS细胞的迁移和侵袭,miR-374a-5p/SRCIN1/Wnt/β-catenin轴有望阐明OS的发病机制,为其抗肿瘤治疗提供新候选靶点。

• 单位
  九江市中医院; 九江市第一人民医院