烫水蛭（蚂蟥）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

作者：胡力; 袁媛^*; 张辉; 张恬; 金艳; 赵玉洋; 蒋超^*

来源：中国现代中药, 2023, 25(08): 1676-1684.

DOI：10.13313/j.issn.1673-4890.20230415002

• 蚂蟥
• 烫水蛭(蚂蟥)配方颗粒
• 聚合酶链式反应

目的：为保障临床用药的安全性和有效性，建立烫水蛭（蚂蟥）及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法：根据烫水蛭（蚂蟥）细胞色素C氧化酶Ⅰ（COⅠ）基因序列设计引物，筛选出烫水蛭（蚂蟥）的稳定引物区间；在区间内筛选获得烫水蛭（蚂蟥）的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，并设计烫水蛭（蚂蟥）特异性鉴别引物TSZ-F、TSZ-R；分别收集烫水蛭（蚂蟥）及其阴性样品，建立烫水蛭（蚂蟥）配方颗粒特异性PCR鉴别方法，并对PCR体系进行优化，对该方法的耐受性和适用性进行考察。结果：当退火温度为54℃、循环数为34次，烫水蛭（蚂蟥）及其配方颗粒经PCR和凝胶电泳后，可在约133 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带，伪品无条带。结论：建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别烫水蛭（蚂蟥）饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒，也为可其中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。

• 单位
  安徽中医药大学; 中国中医科学院