高致病性PRRSV Nsp2变异株Power SYBR Green real time RT-PCR检测方法的建立

作者：郭杨; 陈世界; 林华; 郭万柱; 徐志文; 颜其贵

来源：中国兽医科学, 2009, (05): 410-415.

• 高致病性PRRSV
• Nsp2变异株
• Power SYBR Green实时荧光反转录聚合酶链式反应

根据高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2变异株Nsp2基因保守区的核苷酸序列设计合成了1对引物,建立了Power SYBR Green模式的实时荧光定量RT-PCR方法,用于检测高致病性PRRSV Nsp2变异株。以pMD-Nsp2质粒为阳性对照制作标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果显示,该方法只能检测到高致病性PRRSV Nsp2变异株的特异性扩增信号;检测线性范围广,在模板浓度为3.15×109~3.15×100copies/μL具有良好的线性关系,相关系数(r2)为0.998;最低检测限为3.15copies/μL。对25份疑似高致病性PRRS猪病料的检测结果显示,该方法与病毒分离的符合率为100%。表明,建立的Nsp2-Power SYBR Green RT-PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。

• 单位
  四川出入境检验检疫局; 四川农业大学