非洲猪瘟病毒K196R和A240L蛋白的可溶性表达及酶活力分析

作者：李鹏昊; 梁严予; 王彦伟; 关洋; 逄文强; 田克恭^*

来源：生物技术通报, 2020, 36(11): 70-75.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0216

• 非洲猪瘟
• K196R蛋白
• A240L蛋白
• 可溶性表达
• Western blot鉴定
• 酶活力分析

旨在提供可用候选抗原蛋白,用于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的诊断及免疫预防研究。将ASFV SY18株K196R和A240L蛋白的编码基因进行密码子优化,并在其N端添加促溶标签进行融合表达;TEV酶切后利用亲和层析纯化目的蛋白,并通过Western blot和酶活检测试剂盒对其反应性和体外酶活力进行鉴定。结果显示,K196R和A240L蛋白分别通过添加SUMO和MBP标签实现了可溶性表达,标签去除后蛋白大小分别为22 kD和27 kD左右;Western blot结果显示,K196R和A240L蛋白均能够与ASF阳性血清发生较好的特异性反应;酶活检测结果表明,二者均具有一定的体外酶催化活性。利用大肠杆菌表达的ASFV K196R和A240L可溶性蛋白,具有较好的反应性和一定的体外酶催化活性,可为ASFV的诊断及蛋白的相关功能研究提供一定的依据。