版纳微型猪近交系CMAH基因克隆及亚细胞定位研究

作者：张霞; 宋雪; 王配; 王淑燕; 霍海龙; 潘伟荣; 李罗刚; 曾日彬; 霍金龙^*

来源：河北农业大学学报, 2019, 42(03): 94-98.

DOI：10.13320/j.cnki.jauh.2019.0062

• 胞苷磷酸-N-乙酰神经氨酸羟化酶
• 基因克隆
• 版纳微型猪近交系
• 载体构建
• 亚细胞定位

胞苷磷酸-N-乙酰神经氨酸羟化酶(CMAH)在免疫应答、炎症及肿瘤转移过程中起着重要的作用。前期发现其在版纳微型猪近交系(BMI)颌下腺、脾脏和舌下腺中高表达,且均显著高于其他组织,提示该基因可能在免疫排斥反应中发挥作用。本研究通过前期已成功扩增并且确定的编码区序列,设计带有酶切位点的引物并进行克隆,酶切连接法构建其真核表达载体,通过脂质体法转染猪肾上皮细胞系PK15,通过倒置荧光显微镜检测蛋白表达情况。获得BMI CMAH基因的包含有酶切位点的CDS序列1 746 bp,并且成功构建真核表达载体pEGFP-C1-CMAH。结果表明,该基因编码蛋白主要定位于PK15细胞的细胞质中,部分细胞核中也有表达。上述结果为进一步研究该基因编码蛋白的功能奠定了基础。

• 单位
  云南农业大学; 云南农业职业技术学院