鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用

作者：江丹丹; 林昶; 黄志坚; 肖世峰; 王劭; 林锋强; 程晓霞; 朱小丽; 陈秀琴; 董慧; 陈少莺^*; 陈仕龙^*

来源：中国预防兽医学报, 2022, 44(08): 855-860.

• 鸭腺病毒B血清1型
• 鸭腺病毒B血清2型
• fiber基因
• fiber1基因
• 双重PCR

番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病，其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒，暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2)，将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1)。为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法，本研究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2 fiber1基因序列特征，分别设计了2对特异性引物，通过优化反应条件，建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法。结果显示：优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃，最适引物浓度为0.16μmol/L；利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测，结果显示，该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增，对其他鸭临床常见病原均无扩增，特异性较强。将DAd V-B1 fiber和DAd V-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板，利用该双重PCR方法检测，结果显示，该方法对DAd V-B1 fiber和DAd V-B2 fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μL，对DAdV-B2的最低检出滴度为1×101TCID50，敏感性较高。批内和批间的重复性试验检测结果均一致，重复性好。利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测，结果显示二者的符合率为100%，其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64)。以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好，为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段。

• 单位
  福建农林大学; 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心; 动物科学学院; 福建省农业科学院