构建MDCK Ⅱ-hMDR1-hCYP3A4共表达体系

作者：黄洁琼; 徐云婷; 李佳俊; 汪维鹏; 张洪建

来源：药物生物技术, 2017, 24(04): 289-293.

DOI：10.19526/j.cnki.1005-8915.20170402

• P-糖蛋白
• 代谢酶CYP3A4
• 共表达
• MDCKⅡ细胞
• 细胞毒性
• 相互作用

构建MDCK-hMDR1-CYP3A4双转表达体系,研究CYP3A4和P-gp之间的相互作用。根据基因文库合成CYP3A4基因编码片段,连接到pc DNA3.1/Hypgro表达载体,进行测序。验证正确的重组质粒pc DNA3.1/Hypgro/h CYP3A4转染MDCK-MOCK细胞以及MDCK-hMDR1细胞,经潮霉素B(Hygromycin B)加压筛选阳性克隆,获得稳定高表达人CYP3A4的MDCK-h CYP3A4单转以及MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转稳转细胞株。结果显示相比于空白细胞(MDCK-MOCK)以及阴性细胞(MDCK-MDR1),CYP3A4在MDCK-h CYP3A4、MDCK-hMDR1-h CYP3A4细胞中的表达更稳定并且活性显著增强。MTT结果表明,在MOCK、MDCK-MDR1、MDCK-CYP3A4以及MDCK-MDR1-CYP3A4 4种细胞系中,苏尼替尼的IC50值分别为2.832,5.717,3.628,6.561μmol/L,而伯舒替尼的IC50值分别为0.712 6,4.413,2.184,7.010μmol/L。由于苏尼替尼和博苏替尼是CYP3A4以及P-gp的共同底物,CYP3A4的代谢活性以及P-gp的外排功能共同作用使得苏尼替尼和博苏替尼毒性降低,因而MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转细胞株IC50值比MDCK-hMDR1、MDCK-h CYP3A4明显增大。以上结果说明了构建的稳定单转MDCK-h CYP3A4以及MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转细胞株是具有功能的,并且CYP3A4与P-gp之间的作用是相互影响的,同时该模型的建立也为药物的转运与代谢研究提供更全面的研究技术与思路。

• 单位
  苏州农业职业技术学院; 苏州大学