人脂肪组织来源的干细胞体外诱导为角膜上皮样细胞的分化潜能

作者：钟刘学颖; 刘小伟; 戴荣平; 秦梅; 董方田; 李莹

来源：眼科新进展, 2010, 30(01): 14-19.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2010.01.002

• 吸脂术
• 人脂肪组织来源的干细胞
• 角膜上皮样细胞
• 表皮生长因子
• 碱性成纤维细胞生长因子
• 体外诱导

目的初步探讨人脂肪组织来源的干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSC)体外诱导为角膜上皮样细胞的分化潜能。方法分离、纯化、体外扩增hADSC,流式细胞术鉴定所获得细胞的CD29+、CD34-、CD49d+、CD105+、CD106-的表达情况。成脂、成骨诱导鉴定其多向分化潜能。在DMEM/F12体系、KM体系及上述二者等体积混合的KM/DMEM/F12体系内添加不同梯度浓度的生长因子对hADSC进行体外诱导:0μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、30μg·L-1、40μg·L-1、50μg·L-1的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF),及50μg·L-1EGF+10μg·L-1碱性成纤维细胞生长因子(basicfibro blast growth factor,bFGF)和50μg·L-1EGF+20μg·L-1bFGF。连续诱导21d,观察hADSC形态学的改变及第21天时角膜特异性蛋白AE5(CK3/CK12)的免疫化学表达情况,比较不同培养体系及不同浓度生长因子对hADSC诱导作用的差异。结果流式细胞仪测定传3-5代的细胞CD34-、CD106-、CD29+、CD49d+、CD105+。成脂、成骨体外诱导14d后,油红O、碱性磷酸酶染色阳性率分别为74.6%和29.3%。KM体系中加入终浓度为0～50μg·L-1EGF诱导21d后,hADSCAE5阳性细胞率均占90%以上。其中,40μg·L-1EGF诱导下的AE5阳性细胞率为98.7%,50μg·L-1EGF可达到100%。而加入bFGF的hADSC则为AE5弱阳性。而另2个体系对各浓度EGF、bFGF诱导的hADSC的作用均为阴性。结论人吸脂术废弃液中可获得大量高纯度脂肪组织来源的干细胞,经体外条件诱导具备向角膜上皮样细胞分化潜能。添加EGF的角质细胞培养液有利于其分化,并具有浓度依赖性,bFGF则对分化有抑制性作用。

• 单位
  北京协和医学院; 中国医学科学院; 北京协和医院; 中山大学中山眼科中心