黑曲霉内切β-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效表达

作者：黄君; 张昌毅; 赵述淼; 梁运祥

来源：华中农业大学学报, 2008, (05): 611-615.

DOI：10.13300/j.cnki.hnlkxb.2008.05.004

• 黑曲霉
• β-1
• 4-内切葡聚糖酶
• 毕赤酵母
• 表达 Aspergillus niger
• endo-β-1
• 4-glucanase
• Pichia pastoris
• expression

利用RT-PCR技术,提取黑曲霉(Aspergillusniger)L3的总RNA进行反转录,并通过PCR扩增得到去除天然信号肽的β-1,4-葡聚糖酶基因egⅠ,将其插入到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,使之位于α-因子信号肽下游,并与之同框,构建重组表达质粒pPIC9k-egⅠ,电击转化毕赤酵母GS115,经MM、MD、CMC-Na和G418平板筛选,得到重组毕赤酵母工程菌1#和5#,在摇瓶中β-1,4-葡聚糖酶酶活分别达到1456U/mL和1928U/mL。重组酶最适温度为70℃,最适pH为5.0。