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摘要
【目的】以单增李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)硫氧还蛋白Lmo1903为研究对象，研究其在细菌环境适应过程中的抗氧化应激生物学作用。【方法】使用生物信息学方法分析Lmo1903的进化关系和关键活性位点，使用酶切连接的方法构建Lmo1903蛋白表达载体，获得纯化的重组蛋白，以胰岛素为底物分析其氧化还原酶学活性；同时制备鼠源多克隆抗体，分析其在细胞内的定位；采用核苷酸定点突变技术构建CX1X2C基序中的半胱氨酸点突变蛋白，分析关键位点半胱氨酸对Lmo1903酶活的影响；采用同源重组原理构建lmo1903基因缺失株Δlmo1903和回补株CΔlmo1903，研究lmo1903在单增李斯特菌生长、运动和抗氧化应激方面发挥的功能。【结果】生物信息学分析显示，Lmo1903含有CX1X2C基序，与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的TrxA的亲缘关系较近，属于硫氧还蛋白家族成员，主要定位在细菌细胞质中，具有较强的还原酶学活性，突变CX1X2C基序中的半胱氨酸残基会显著降低Lmo1903的还原酶活能力。缺失lmo1903不影响单增李斯特菌的生长能力，但显著减弱了细菌在铜离子胁迫环境中的氧化应激耐受能力，且影响鞭毛合成相关因子的转录水平和细菌的运动能力。【结论】本研究首次证实了单增李斯特菌硫氧还蛋白Lmo1903具有还原酶学活性，介导细菌运动和对氧化环境的适应。
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单位浙江农林大学; 动物科技学院; 宁波检验检疫科学技术研究院
