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摘要
目的构建人IL-31原核表达载体,在大肠杆菌中表达,研究人IL-31对人表皮角化细胞分泌趋化因子MIP-3β的活性影响。方法大量培养pET28a(+)-hIL-31工程菌株,提取质粒,BamHI、HindⅢ双酶切,并将其连接到原核表达载体pET32a(+),通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达。用RT-PCR检测该目的蛋白对人表皮角化细胞HaCaT表达趋化因子MIP-3β的影响。结果原核表达质粒pET32a(+)-hIL-31构建正确,经双酶切、PCR和序列测定鉴定,序列正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达,纯化后的目的蛋白可刺激人表皮角化细胞表达MIP-3β。结论原核表达质粒pET32a(+)-hIL-31构建正确,纯化后的蛋白具有生物学活性,可刺激人表皮角化细胞表达趋化因子MIP-3,β为研究人IL-31的作用及其作用机制和制备单克隆抗体奠定了基础。
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