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摘要
目的建立一种最优化的提取高质量人类精液基因组DNA的方法,为辅助生殖技术男性不育分子生物学科学研究提供技术支持。方法提取人类精液基因组DNA,优化设计实验步骤,研究初始样品类型、初始样品量、二硫苏糖醇(DTT)剂量、蛋白酶K(PK)消化时间、混匀震荡等因素对DNA的提取效果的影响,应用核酸定量和琼脂糖凝胶电泳分析比较各组提取效果的差异。结果应用自然分层后的精液沉淀提取DNA较原始精清可获得较高浓度的DNA。初始样品量为100～150μl时可获得较好的提取效果,随着样本量的增加,DNA提取效果逐渐下降。在样本中加入DTT可以明显提高DNA产量,DTT的加入利于DNA裂解及提取,且增加了DNA的稳...
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