宫颈癌中CALCA基因甲基化与HPV16-E7致癌蛋白表达的依存关系

作者：盛磊; 马丽; 希尔扎提江·苏来曼; 阿布力孜·阿布杜拉; 阿比达·阿不都卡德尔

来源：科技导报（北京）, 2014, 32(10): 63-67.

• 降钙素相关肽基因
• 宫颈癌
• RNA干扰
• HPV16
• E7基因

选择HPV16阳性宫颈癌细胞和RNAi技术,研究CALCA基因甲基化与HPV16-E7致癌蛋白表达的依存关系。构建慢病毒siRNA重组表达载体,建立稳定表达HPV16-E7-siRNA的RNAi细胞模型。以SiHa细胞和RNAi细胞模型的基因组DNA为对象,选择CALCA基因启动子区富含CpG岛屿的目标片段,使用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)筛查分析,研究RNAi抑制HPV16-E7表达后,CALCA基因甲基化状态的可逆性程度。选出CALCA基因启动子区富含CpG位点的目标片段,其大小为365 bp,含有19个CpG岛屿,发现其中13个CpG位点的胞嘧啶在SiHa细胞基因组DNA中发生了甲基化(13/19),而在表达HPV16-E7-siRNA的RNAi细胞模型中,所有CpG位点的甲基化已发生逆转(0/19位点)。本研究从细胞水平证明了宫颈癌细胞内的CALCA基因启动子高甲基化对HPV16-E7致癌蛋白表达有依赖性,为进一步研究E7蛋白的作用及致癌机制奠定了重要的物质基础。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院; 基础医学院; 新疆医科大学