十足目虹彩病毒(DIV1)环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

作者：邹莹; 郭晓萌; 万晓媛; 邱亮; 张庆利^*

来源：渔业科学进展, 2020, 41(06): 156-164.

DOI：10.19663/j.issn2095-9869.20200524001

• 十足目虹彩病毒(DIV1)
• 虾血细胞虹彩病毒(SHIV)
• 环介导等温扩增(LAMP)
• 检测方法

本研究以十足目虹彩病毒(Decapod iridescent virus 1, DIV1)主要衣壳蛋白基因为靶序列设计引物,建立了DIV1的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测方法,并以pMD18-DIV1质粒标准品为模板对该方法的检测灵敏度、检测特异性等进行了评估。结果显示,此方法最适反应温度为64.4℃,优化后的25μl反应体系中包含2.5μl 10×Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg2+、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 U Bst 2.0 WarmStart? DNA聚合酶、0.8μmol/L EvaGreen?和4.4μl ddH2O。该方法检测灵敏度下限为3.54×102拷贝/反应;与虾肝肠胞虫(EHP)、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)、对虾偷死野田村病毒(CMNV)、传染性皮下及造血组织坏死病病毒(IHHNV)、白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)和黄头病毒(YHV)等主要虾类病原没有交叉反应;具有较好的重复性和稳定性。以GeneFinder?替换EvaGreen?并将其预置于反应管内,结合上述扩增方法可实现对DIV1的现场快速高灵敏检测。本研究建立的DIV1-LAMP实时荧光定量和现场检测方法具有灵敏、特异和快速等特点,为近几年新发虾类病原DIV1的定性、定量以及现场快速检测提供了新的技术选择,有利于对虾养殖业中开展DIV1的监测、预警和防控。

• 单位
  生命学院; 上海海洋大学; 中国水产科学研究院黄海水产研究所