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摘要
目的 克隆编码麻牛膝(Cyathula capitata(Wall.) Moq.)CcTSK蛋白的基因全长,通过基因重组技术制备表达质粒,对表达产物进行生物学预测和抑菌分析。方法 以麻牛膝嫩叶为材料,完成CcTSK基因cDNA的克隆。采用生信软件分析该基因及编码蛋白的生物学特征。构建CcTSK基因原核表达载体,并转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态中,IPTG诱导表达,考察CcTSK-GST融合蛋白的表达菌株对低浓度抗生素的敏感性、自身生长变化及在较高浓度抗生素下的存活率。结果 CcTSK基因的gDNA为12613 bp,CDS为3855 bp,共编码1284个氨基酸。CcTSK蛋白为亲水性不稳定蛋白,没有跨膜结构域,属于没有信号识别功能的非分泌蛋白,亚细胞定位预测该蛋白可能位于细胞核,并且具有核定位信号,含有TPR重复序列与LRR重复序列结构域,二级结构主要有α-螺旋(占53.89%)、无规卷曲(占32.79%)、延伸链(占8.88%)和β-转角(占4.44%)。经IPTG诱导后,CcTSK-GST融合蛋白的表达抑制大肠埃希菌生长。低浓度抗生素测试结果显示,CcTSK-GST表达菌株对氯霉素(chloramphenicol,Cam)最敏感;高浓度抗生素处理下,CcTSK-GST的表达使得抑菌现象显著增强。结论 成功获得编码CcTSK蛋白的基因全长及原核表达质粒,并对其生物学特征进行了分析比较,该蛋白与拟南芥AtTSK蛋白有较高相似性。此外,CcTSK-GST融合蛋白的表达对大肠埃希菌增殖具有抑制作用,并且显著增强抗生素所产生的抑菌现象。
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