尼古丁通过增强自噬减轻脂多糖诱导的急性肺损伤炎症反应

作者：袁关利; 刘银凤; 韩卓笑; 孟爱宏^*

来源：国际呼吸杂志, 2022, 42(13): 989-996.

• 急性肺损伤
• 自噬
• NLRP3炎症小体
• 尼古丁
• 模型, 动物

目的探讨尼古丁在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤炎症反应中的作用及机制。方法本研究为实验研究。动物实验部分, 应用LPS构建急性肺损伤小鼠模型, 将C57BL/6J小鼠24只, 按体质量排序, 采用蛇形分组法分为4组, 每组6只, 对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组。留取肺组织行HE染色, 肺泡灌洗液行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)水平。细胞实验部分, 采用MH-S细胞系, 分为4组, 对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组, 取细胞上清液行ELISA检测IL-1β水平, 采用细胞裂解液提取总蛋白行蛋白免疫印迹法检测NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1、LC3BⅡ、LC3BⅠ、P62蛋白水平, 免疫荧光检测LC3B表达, 透射电镜观测自噬小体数量。结果 LPS组较对照组, 肺组织出现明显炎性细胞浸润。支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高;LPS+尼古丁组较LPS组, 肺组织炎性细胞浸润减轻, 支气管肺泡灌洗液和细胞上清液中IL-1β水平降低;LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组, 肺组织炎性细胞浸润加重, 支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高, 差异均有统计学意义(F值分别为446.40、656.40, P值均<0.001)。蛋白免疫印迹法检测各组MH-S细胞裂解液, LPS组较对照组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1表达水平升高, LPS+尼古丁组较LPS组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase 1表达水平下降, LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1表达水平升高, 差异均有统计学意义(F值分别为180.00、301.70、105.80, P值均<0.001)。使用透射电镜观察4组MH-S细胞自噬小体, 采用蛋白免疫印迹法检测4组MH-S细胞中P62及LC3BⅡ/LC3BⅠ表达显示, 与对照组比较, LPS组自噬小体数量增多, P62表达水平降低, LC3BⅡ/LC3BⅠ升高;LPS+尼古丁组较LPS组自噬小体数量增多, P62表达水平降低, LC3B Ⅱ/LC3BⅠ升高, LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组自噬小体数量减少, P62表达水平升高, LC3B Ⅱ/LC3BⅠ降低, 差异均有统计学意义(F值分别为45.25、152.00、137.40, P值均<0.05)。结论尼古丁通过增强自噬减弱LPS诱导的急性肺损伤炎症反应及NLRP3炎症小体的活性。

• 单位
  秦皇岛市第一医院; 河北医科大学第二医院