RNA干扰抑制CYP3A4基因表达的实验研究

作者：陈杰; 赵立子; 邓颖; 王雪丁; 关溯; 黄民

来源：中国基层医药, 2006, 13(04): 543-545.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1008-6706.2006.04.008

• RNA干扰
• 细胞色素P450
• 基因表达
• 环磷酰胺
• 实验室技术和方法

目的研究质粒表达型短发夹RNA(smallhairpinRNA,shRNA)对CHL-3A4转基因细胞的细胞色素P4503A4(cytochromeP4503A4,CYP3A4)基因表达的影响。方法设计并构建3条shRNA真核表达载体(CYP3A4Ⅰ、CYP3A4Ⅱ、CYP3A4Ⅲ),脂质体转染CHL-3A4转基因细胞。转染48h后,TR-PCR和WesternBlotting分别观察3条shRNA对CYP3A4mRNA和蛋白表达的影响;噻唑蓝(MTT)观察shRNA抑制环磷酰胺对CHL-3A4转基因细胞毒性作用。结果CYP3A4Ⅲ表达载体的shRNA分别能抑制CHL-3A4细胞的CYP3A4mRNA表达(70%)及蛋白表达(75%),抑制环磷酰胺对CHL-3A4细胞(75%)细胞毒作用。结论RNA干扰能显著抑制CYP3A4基因的表达,RNA干扰技术为肝细胞色素P450的研究提供了新的方法。

• 单位
  中山大学