牛坏死杆菌43 kDa外膜蛋白真核质粒在BHK细胞中的瞬时表达

作者：张思瑶; 王志慧; 贺显晶; 蒋剑成; 汪锋锋; 王丽娜; 肖佳薇; 郭东华^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(02): 149-156.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.002978

• 牛坏死杆菌
• 外膜蛋白
• BHK细胞
• 瞬时表达

目的构建含有牛坏死杆菌43 kDa外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因的真核表达重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP,并检测其在BHK细胞中的瞬时表达。方法将43 kDa OMP核苷酸全基因序列与pCAGGS-HA载体连接,构建重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP,转化至大肠埃希菌,将鉴定正确的阳性菌转染BHK细胞,采用间接免疫荧光和Western blot法检测重组蛋白的表达。结果经双酶切及PCR鉴定,重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP构建正确;转染pCAGGS-43 kDa OMP的BHK细胞镜下观察可见绿色荧光,Western blot检测可见相对分子质量为43 000的目的蛋白。结论成功构建了pCAGGS-43 kDa OMP真核表达质粒,可在BHK细胞中瞬时表达,为进一步研究牛坏死杆菌感染机制奠定了基础。

• 单位
  动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学