类弹性蛋白多肽-红色荧光蛋白融合蛋白的表达纯化及细胞相容性

作者：刘宁; 崔梅英; 王明月; 杨泽斌; 王浩; 毛禹; 方楷漪; 夏薇^*; 关新刚

来源：北华大学学报(自然科学版), 2021, 22(01): 42-46.

• 类弹性蛋白多肽
• 红色荧光蛋白
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 细胞相容性

目的构建携带红色荧光蛋白(m Cherry)标签的类弹性蛋白(ELP)原核表达载体,并表达纯化ELPm Cherry融合蛋白,探讨ELP-mCherry融合蛋白与细胞的相容性.方法对利用限制性内切酶Xba I和Xho I对m Cherry质粒和p ET28a-ELP载体同时进行双酶切,将酶切产物回收、连接并转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,构建重组质粒p ET28a-ELP-mCherry;将重组质粒转化到BL21 (DE3)大肠杆菌感受态细胞中,诱导表达ELPm Cherry融合蛋白;利用可逆转变循环(ITC)法对ELP-mCherry融合蛋白进行纯化;通过MTT法探讨ELPm Cherry融合蛋白与人胚肾上皮细胞HEK293T和小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3的细胞相容性.结果 DNA测序结果显示成功构建了ELP-mCherry原核表达载体;利用BL21(DE3)大肠杆菌表达系统成功表达ELP-mCherry融合蛋白,通过ITC法纯化得到了高纯度融合蛋白.MTT结果表明:在所有ELP-mCherry蛋白测试浓度下,HEK293T和NIH3T3细胞存活率接近或超过100%.结论成功构建ELP-mCherry原核表达载体,成功表达并纯化得到高纯度的ELP-mCherry融合蛋白,ELP-mCherry融合蛋白在HEK293T和NIH3T3细胞中具有良好的细胞相容性.

• 单位
  北华大学