新生小鼠炎症-缺氧缺血脑损伤模型的建立

作者：朱将虎; 朱敏丽; 胡莹莹; 方明楚; 盛汉松; 林振浪^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, 36(06).

• 早产儿
• 炎症
• 缺氧缺血
• 脑损伤

目的建立新生小鼠炎症-缺氧缺血脑损伤模型。方法本研究采用3 d龄C57BL/6小鼠, 每组有3个独立检测指标, 每个实验指标各6只, 共144只。3 d龄新生小鼠腹腔内分别注射0.05 mg/kg、0.50 mg/kg的脂多糖(LPS), 24 h后检测小鼠体重增长情况, 2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死情况, 苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理情况, 以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测脑组织细胞凋亡指数, 根据结果确定一个对小鼠损伤不明显的剂量(即亚损伤剂量)。3 d龄新生小鼠结扎左侧颈总动脉后, 置于8%O2缺氧舱分别缺氧(HI)20、40 min, 24 h后检测小鼠体重、脑组织TTC、HE以及TUNEL染色, 根据结果确定一个对小鼠脑损伤不明显的时间(即亚损伤时间)。最后, 3 d龄新生小鼠分为两组:实验组(LPS+HI组)及对照组(Sham组)。根据上述实验得出的结果, 实验组小鼠予亚损伤剂量的LPS, 2 h后再给予亚损伤的缺氧缺血时间;对照组给予磷酸盐缓冲液(PBS)腹腔内注射, 2 h后假手术处理且不缺氧。24 h后检测小鼠体重, 脑组织TTC、HE以及TUNEL染色。应用SPSS 23.0统计软件分析, 计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示, 多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA), 方差齐性资料两两比较用SNK检验;方差不齐资料两两比较用Dunnett’s T3检验。两组间比较采用t检验。结果 LPS 0.05 mg/kg组体重[(2.81±0.14) g]与PBS组[(2.81±0.16) g]比较, 差异无统计学意义(P>0.05), 而LPS 0.50 mg/kg组体重[(2.63±0.09) g]较PBS组轻, 差异有统计学意义(P<0.05)。HI 20组新生小鼠未见明显脑梗死及少量细胞凋亡[(2.80±1.74)%], HI 40组新生小鼠大脑出现脑梗死灶及大量的细胞凋亡[(55.67±7.81)%]。最后, 实验组(LPS+HI组)体重[(2.66±0.09) g]较Sham组[(2.83±0.12) g]轻, 差异有统计学意义(t=2.565, P<0.05), 同时LPS+HI组TTC染色显示明显脑梗死灶, HE染色显示神经细胞病理损伤形态, TUNEL法显示神经细胞凋亡LPS+HI组[(52.17±9.50)%]比Sham组[(2.15±1.30)%]显著增加, 差异有统计学意义(t=12.873, P<0.05)。结论 LPS联合HI可加重新生小鼠脑损伤, 提示炎症可对未成熟脑缺氧缺血性损伤起增敏作用。

• 单位
  温州医科大学附属第二医院