沉默蛋白激酶C对高糖刺激成纤维细胞Toll样受体及核因子kappa B基因表达的影响

作者：尚婷婷^*; 闫卉

来源：中国中西医结合外科杂志, 2020, 26(05): 783-791.

• 成纤维细胞
• 高糖
• 小干扰RNA
• 蛋白激酶C

目的:探索siRNA沉默蛋白激酶C(PKC)对高糖刺激成纤维细胞在Toll样受体(TLRs)信号传导通路中TLRs及核因子kappa B(NF-κB)表达的影响。方法:高糖刺激下用real-time PCR检测TLR2、TLR4的表达水平,确定何种受体发生改变后进行后续实验。设计并合成针对PKC不同亚单位的特异性siRNA:PKC-αsiRNA、PKC-βsiRNA、PKC-δsiRNA,在高效率转染的基础上,对PKC进行沉默,高糖刺激后用real-time PCR方法检测TLRs、NF-κBp50和NF-κB p65的表达情况,以低糖培养作对比。结果:成纤维细胞中高糖刺激下TLR2的mRNA水平显著升高(P <0.05),而TLR4的m RNA表达无明显变化(P> 0.05)。在高糖刺激下PKC-αsiRNA、PKC-δsiRNA可下调TLR2、NF-κB p65的m RNA水平(P <0.05),而PKC-βsiRNA对TLR2、NF-κB p65的mRNA水平无影响(P> 0.05)。与低糖培养条件对比,高糖刺激下NF-κB p50水平无改变(P> 0.05),而且PKC-αsiRNA、PKC-βsiRNA和PKC-δsiRNA转染后不改变细胞中NF-κB p50的水平。结论:成纤维细胞信号传导通路中PKC-α、PKC-δ位于TLR2、NF-κB p65的上游。

• 单位
  天津市中西医结合医院