小鼠肝脏多种类型细胞同步分离法

作者：甘建; 纪翠锋; 毛小荣; 王江涛; 吕春燕; 史逸凡; 廖瑶; 贺亚丽; 舒莲; 李隆; 李俊峰^*

来源：中华肝脏病杂志, 2023, 31(05).

• 肝细胞
• 肝星状细胞
• 淋巴细胞
• 分离
• 原代培养

目的探索小鼠肝细胞、肝星状细胞(HSC)和淋巴细胞分离、纯化的简易可行方案。方法雄性C57bl/6小鼠采用经肝门静脉灌注消化法获取细胞悬液, 随后percoll非连续密度梯度离心法分离、纯化细胞。台盼蓝拒染法检测细胞存活率, 糖原染色、细胞角蛋白18和透射电子显微镜鉴定肝细胞, α-平滑肌肌动蛋白联合结蛋白免疫荧光鉴定HSC, 流式细胞术分析肝脏淋巴细胞亚群。结果体质量约22 g的小鼠其肝脏经分离纯化后可获得约2.7×107个肝细胞, 约5.7×105个HSC, 约4.6×106个肝单个核细胞, 各组分中细胞存活率均> 95%。肝细胞中可见成片紫红色糖原颗粒和细胞角蛋白18, 电镜结果显示肝细胞内存在丰富的细胞器, 细胞间存在紧密连接;HSC表达α-平滑肌肌动蛋白和结蛋白;流式细胞术显示肝单个核细胞中包括CD4、CD8、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞等淋巴细胞亚群。结论肝门静脉灌注消化法可同步分离小鼠肝脏中多种原代细胞, 具有简便、高效的特点。

• 单位
  第一临床医学院; 兰州大学