幼虫芽孢杆菌和蜂房蜜蜂球菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作者：何晓杰; 王科珂; 叶尔保勒; 阿斯喀; 张婕妤; 哈森; 季新成; 王振宝

来源：中国动物传染病学报, 2018, 26(03): 51-56.

• 美洲幼虫腐臭病
• 幼虫芽孢杆菌
• 欧洲幼虫腐臭病
• 蜂房蜜蜂球菌
• 双重TaqMan荧光定量PCR

为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序列分别设计特异性引物和探针,建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法与其他病原无交叉反应;对P.larvae和M.pluton的检测灵敏度均达10 copies/μL的阳性质粒;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于2%。应用该方法对200份实验室模拟样品和200份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于AFB与EFB的快速鉴别诊断和早期监测,以及蜂产品中P.larvae和M.pluton的定量分析。

• 单位
  重庆工商大学; 伊犁职业技术学院; 新疆出入境检验检疫局; 伊犁出入境检验检疫局