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摘要
目的探讨高糖环境下卡格列净通过抑制lncRNACO9缓解肾小管上皮细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2), 将其分为正常葡萄糖(NG)组、高渗(HO)组、高糖(HG)组、高糖+二甲基亚砜组(DMSO组)、高糖+卡格列净组(CANA组)、高糖+阴性对照小干扰RNA组(si-NC组)、高糖+lncRNACO9小干扰RNA组(si-CO9组)、高糖+空载质粒组(PEX-NC组)、高糖+lncRNACO9过表达质粒组(PEX-CO9组)、高糖+卡格列净+lncRNACO9过表达质粒组(CANA+PEX-CO9组)。采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法与四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖率;Western blotting检测凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤 2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤 2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、活化型Caspase-3]与核因子(NF)-κB p50亚基及其前体p105蛋白的相对表达量, 计算Bax/Bcl2蛋白相对表达量比值;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNACO9与NF-κB1 mRNA的相对表达量。采用荧光原位杂交检测lncRNACO9亚细胞定位, 基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析预测其功能。收集临床正常对照组(NC组, 5例)与糖尿病肾脏病组患者(DKD组, 5例)肾脏样本, 检测其近端肾小管上皮细胞lncRNACO9的表达。两组间比较采用独立样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果与NG组相比, HG组细胞增殖率降低, Bax/Bcl2蛋白相对表达量比值、Caspase-3与活化型Caspase-3蛋白相对表达量、细胞凋亡率、lncRNACO9均显著上调;而与HG组相比, CANA组细胞凋亡率下降, lncRNACO9表达下调(P<0.05)。lncRNACO9定位于细胞质。GO与KEGG分析显示, lncRNACO9与细胞凋亡通路相关。在DKD组肾脏组织近端肾小管上皮细胞lncRNACO9表达较NC组上调(P<0.05)。相较于HG组, si-CO9组凋亡蛋白相对表达量、凋亡率及NF-κB1 mRNA、NF-κB p50亚基及其前体p105蛋白相对表达量下降, PEX-CO9组则增高(P<0.05)。与CANA组相比, CANA+PEX-CO9组的凋亡蛋白相对表达量、凋亡率与NF-κB1 mRNA、NF-κB p50亚基及其前体p105蛋白相对表达量上升(P<0.05)。结论卡格列净可通过抑制lncRNACO9的表达缓解高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡。
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