一种来源于喜热梭孢壳的耐热型β-甘露聚糖酶

作者：施鑫磊; 方韵颖; 尉俏女; 王佳堃; 斯越秀; **法; 钱国英; 尹尚军^*; 王谦^*

来源：微生物学报, 2021, 61(09): 2815-2828.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20200697

• 喜热梭孢壳
• 甘露聚糖酶
• 热稳定性
• 聚沉
• 二级结构

【目的】本文旨在挖掘满足工业加工所需的新型耐热β-甘露聚糖酶。【方法】从丝状真菌喜热梭孢壳中克隆甘露聚糖酶基因Mtman1,利用毕赤酵母表达系统进行异源表达,研究重组酶的酶学性质和热处理过程中蛋白构象变化情况。【结果】序列分析显示,Mtman1基因编码409个氨基酸,包含一段20个氨基酸的信号肽序列和一个GH5家族结构域;经毕赤酵母表达的重组MtMAN1蛋白约为60 kDa,存在N-糖基化修饰,该酶的最适反应pH和温度分别为6.0和70℃,催化刺槐豆胶底物的Km和Vmax分别为4.28±0.73 mg/mL和203.9±14.61μmol/(s·mg);MtMAN1在60℃下十分稳定,在80℃、90℃和100℃下处理10 min后,分别能维持(68.23±7.47)%、(56.01±5.69)%和(14.91±2.92)%的残余活性,且二级结构和最大发射波长基本没有发生变化,提示其构象维持稳定;此外,该酶对较低浓度的Fe2+(<0.1 mmol/L)、Cu2+(<0.1 mmol/L)、Ca2+(<0.5 mmol/L)、Mg2+(<0.1 mmol/L)或Zn2+(<0.1 mmol/L)耐受能力较强。【结论】MtMAN1是一种耐热的β-甘露聚糖酶,在饲料制粒等需要高温处理的工业加工工艺中具有较好的应用前景。

• 单位
  浙江中医药大学; 基础医学院; 动物科学学院; 浙江大学; 浙江万里学院