miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1促进人牙髓干细胞成骨分化

作者：王小娟; 朱友明^*

来源：安徽医科大学学报, 2021, 56(11): 1762-1767.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.11.016

• miR-27a-3p
• Yes相关蛋白1
• 人牙髓干细胞
• 成骨分化

目的探讨miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1(YAP1)基因对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响。方法体外分离培养hDPSCs细胞,将miR-27a-3p模拟物(miR-27a-3p mimics,过表达组)、miR-27a-3p抑制剂(miR-27a-3p inhibitor,敲低组)、miR-NC(对照组)分别转染至hDPSCs细胞中,检测miR-27a-3p表达水平的改变对YAP1表达的影响。采用TargetScan数据库检索miR-27a-3p的靶基因。应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和YAP1的靶向关系。将miR-27a-3p mimics、miR-NC转染到hDPSCs特定时间后收集细胞,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot等检测经典的成骨标志物骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、成骨转录因子-2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、YAP1 mRNA和蛋白表达水平。应用MTT比色法验证miR-27a-3p和YAP1对细胞增殖活性的影响。结果过表达组hDPSCs细胞中miR-27a-3p的表达水平较对照组显著上调(P<0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平下调(P<0.05)。而敲低组miR-27a-3p的表达水平较对照组明显下降(P<0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平增高(P<0.05)。生物信息学分析表明,miR-27a-3p作用于YAP1的3′UTR区,双荧光素酶报告基因实验验证了YAP1是miR-27a-3p的靶基因。qRT-PCR、Western blot检测显示,与对照组相比,miR-27a-3p过表达时hDPSCs中BMP-2、RUNX2、OPN mRNA和蛋白的表达水平上调(P<0.05)。MTT检测显示,miR-27a-3p过表达可明显上调hDPSCs增殖率(P<0.05),而YAP1过表达则会降低hDPSCs的增殖率(P<0.05)。结论 miR-27a-3p可能通过靶向调控YAP1促进hDPSCs成骨分化。

• 单位
  中心实验室; 安徽医科大学