LIMD2基因表达对食管癌细胞增殖、凋亡及ERK/MAPK信号通路的影响

作者：李险波; 张志强; 韩小勇; 甄志鹏; 李焕芬; 赵钦

来源：局解手术学杂志, 2022, 31(08): 669-675.

• LIM结构域2
• 食管癌细胞
• 细胞外信号调节激酶
• 丝裂原活化蛋白激酶
• 增殖
• 凋亡

目的 探讨LIM结构域2(LIMD2)对食管癌细胞增殖、凋亡的影响，及其对细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的调控作用。方法 取10例食管癌患者癌组织及癌旁组织标本，采用q RT-PCR检测LIMD2 m RNA表达，采用免疫荧光染色检测LIMD2蛋白表达，采用Western blot法检测ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达。取人食管癌细胞(KYSE30、EC9706)和人正常食管上皮细胞(HEEC)，采用q RT-PCR及免疫荧光染色检测细胞中LIMD2 m RNA及蛋白表达，筛选出LIMD2 m RNA及蛋白表达最高的EC9706细胞进行后续试验。取EC9706细胞，分为对照组(常规培养)、Si-LIMD2组(转染LIMD2干扰序列的腺病毒载体)、Si-NC组(转染不含LIMD2干扰序列的空腺病毒载体)、PD98059组(ERK/MAPK通路阻断剂)、ISO组(ERK/MAPK通路激活剂)、Si-LIMD2+ISO组(在Si-LIMD2组基础上加入ISO溶液);采用q RT-PCR及免疫荧光染色检测细胞中LIMD2 m RNA及蛋白表达;采用CCK-8法检测细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;采用Western blot法检测细胞ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK、细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK2、caspase-3、整合素β1、黏着斑激酶(FAK)、整合素连接激酶(ILK)表达。结果 LIMD2 m RNA及蛋白在食管癌组织及KYSE30细胞、EC9706细胞中的表达均较高，且在EC9706细胞中的表达高于KYSE30细胞，差异均有统计学意义(P <0.05); p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白在食管癌组织中表达较高(P <0.05)。与对照组相比，Si-LIMD2组和PD98059组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较低，增殖活性较低，G0/G1期比例较高，S期及G2/M期比例较低，凋亡率较高，cyclin D1、CDK2蛋白表达较低，caspase-3蛋白表达较高，差异均有统计学意义(P <0.05),ISO组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较高，增殖活性较高，G0/G1期比例较低，S期及G2/M期比例较高，凋亡率较低，cyclin D1、CDK2蛋白表达较高，caspase-3蛋白表达较低，差异均有统计学意义(P <0.05);与Si-LIMD2组相比，Si-LIMD2+ISO组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较高，增殖活性较高，G0/G1期比例较低，S期及G2/M期比例较高，凋亡率较低，cyclin D1、CDK2蛋白表达较高，caspase-3蛋白表达较低，差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 沉默LIMD2基因表达可能通过抑制ERK/MAPK磷酸化途径激活而抑制食管癌细胞增殖、促进其凋亡。

• 单位
  河北省人民医院; 保定市第一中心医院