传染性造血器官坏死症重组腺病毒载体的构建

作者：李守湖; 范玉锋; 高欣; 李宝玉; 吴鹏程; 胡永浩; 柳纪省

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2018, 46(05): 37-42.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2018.05.006

• 传染性造血器官坏死症
• G基因
• 腺病毒载体

【目的】克隆传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)G基因,构建其重组腺病毒载体,为IHN预防及疫苗的研制提供参考。【方法】通过RT-PCR和PCR技术扩增IHNV G基因,将G基因插入到腺病毒穿梭载体中,再用带有目的基因的腺病毒载体与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组,构建重组腺病毒质粒,通过PCR扩增及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞进行包装,获得带有目的基因的重组腺病毒,通过观察绿色荧光蛋白表达情况来监控重组腺病毒,用Western-blot法检测糖蛋白的表达,并测定重组腺病毒的TCID50。【结果】成功克隆出IHNVG基因,其长度为1 533bp。成功构建了IHNV G蛋白重组腺病毒载体。GFP监测显示,重组腺病毒转染成功。重组腺病毒能在HEK-293细胞中表达出分子质量约58ku的产物,与预期相符,其TCID50达到1.0×1010.4mL-1。【结论】成功构建了带有IHNVG基因的重组腺病毒载体,重组腺病毒能高效表达,滴度较高。

• 单位
  甘肃农业大学; 兰州威特森生物科技有限公司