神经纤毛蛋白-1的干扰RNA通过诱导结直肠癌细胞p27核转位影响细胞自噬与凋亡水平的研究

作者：赖依虹; 黄秀萍; 滕斓; 林壁涛

来源：胃肠病学和肝病学杂志, 2023, 32(06): 607-612.

DOI：10.3969/j.issn.1006-5709.2023.06.002

• 结直肠癌
• 神经纤毛蛋白-1
• 自噬
• 凋亡
• 核转位

目的 探究RNA干扰神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞自噬与凋亡的影响及其机制。方法 将人结直肠癌细胞系DLD-1随机分为对照组、sh-NC组、sh-NRP-1组，进行慢病毒感染后收集各组细胞，实时荧光定量PCR和Western blotting测定细胞的感染效果，CCK-8法检测细胞增殖活性，免疫荧光染色观察细胞内p27蛋白的亚细胞定位，Western blotting检测细胞质与细胞核内p27蛋白表达变化，透射电子显微镜观察细胞自噬情况，Western blotting检测细胞自噬相关蛋白表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果 感染sh-NRP-1慢病毒液的细胞中NRP-1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05);与对照组和sh-NC组比较，sh-NRP-1组细胞增殖活性显著下降，细胞核内p27荧光染色明显增强，细胞质内p27蛋白相对表达量显著下调，而细胞核内p27蛋白相对表达量显著上调，可见较多双层膜的自噬小体，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高，Beclin-1蛋白表达显著上调而p62蛋白表达显著下调，同时，细胞凋亡率显著增加，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰NRP-1能够抑制CRC细胞增殖活性，促进细胞自噬与凋亡，该作用可能与其调控p27蛋白的亚细胞定位有关。

• 单位
  南方医科大学南方医院