细粒棘球绦虫TSP 3基因的生物信息学分析及原核表达

作者：陆宝燕; 王宁; 赵鹏鹏; 县锦雯; 王正荣^*; 薄新文^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(11): 1297-1302.

DOI：10.13350/j.cjpb.221112

• 细粒棘球绦虫
• TSP3
• 生信分析
• 原核表达

目的 为分析细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)TSP3基因的生物信息学特性并表达其非跨膜区蛋白。方法 本研究利用PCR扩增Eg-TSP3全长基因及非跨膜区序列，采用生物信息学软件对Eg-TSP3蛋白的理化性质、结构特点及亲缘进化关系进行分析；利用RT-QPCR分析TSP3在细粒棘球绦虫不同发育阶段中的相对转录水平；并构建重组质粒，经双酶切鉴定，将其转化至大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)后，采用SDS-PAGE检测TSP3蛋白的表达，通过western blot对蛋白进行抗原性分析。结果 生物信息学分析结果显示，Eg-TSP3基因全长681 bp,编码226个氨基酸，蛋白分子式为C1113H1772N270O297S20,无信号肽，有4个跨膜区，理论相对分子质量约24×103,含有5个B细胞抗原表位，为稳定的胞内蛋白。Eg-TSP3的氨基酸序列与绦虫属的氨基酸序列一致性为90%以上，进化关系中两者亲缘性极近，与人的氨基酸序列一致性为42.2%,进化关系中两者亲缘性较远。TSP3基因在细粒棘球绦虫的原头蚴、包囊壁以及成虫阶段均有转录，且转录水平无显著差异。双酶切鉴定及测序分析，证明成功构建重组质粒pET32a-TSP3,重组质粒转化BL21后成功诱导表达蛋白，Western blot结果显示，该蛋白具有良好的反应原性。结论 本研究初步表明Eg-TSP3蛋白是一个具有潜在研究价值的疫苗免疫靶点，为进一步研究囊型包虫病的疫苗候选分子奠定了基础。

• 单位
  动物科技学院; 石河子大学; 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所