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摘要
目的探讨用小干扰RNA(siRNA)沉默信号传导和转录激活因子6(signal transducer and activator of transcription 6, STAT6), 能否抑制小鼠嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎(eosinophilic chronic rhinosinusitis, ECRS)的产生。方法 2022年3—9月期间, 48只BALB/c雌性小鼠随机分为Control(对照)组、Vehicle(转染试剂)组、Scramble siRNA(对照siRNA)组和STAT6 siRNA组, 每组12只。用卵清蛋白(OVA)联合金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B, SEB)诱导小鼠ECRS, 并用siRNA鼻腔滴注进行干预。随后收集外周血以及鼻黏膜组织标本。血细胞分析仪检测外周血嗜酸粒细胞(Eos)的数目及百分比;酶联免疫吸附实验检测外周血总免疫球蛋白E(IgE)和OVA-特异性IgE(OVA-sIgE)水平, 以及鼻黏膜组织中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-5、IL-17A和嗜酸粒细胞趋化因子1(Eotaxin-1)的表达量;用苏木精-伊红(HE)染色鼻黏膜组织切片, 在高倍视野(HPF)下对Eos进行计数;蛋白免疫印迹检测鼻黏膜中STAT6和磷酸化STAT6(p-STAT6)蛋白水平;免疫荧光染色对鼻黏膜中p-STAT6表达进行定位。采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果 STAT6 siRNA组小鼠外周血Eos计数、Eos百分比、总IgE以及OVA-sIgE水平[(0.318±0.045)×103/μl、(3.667±0.479)%、(102.070±13.205)ng/ml和(38.870±7.352)ng/ml]明显低于Vehicle组[(0.532±0.049)×103/μl、(6.710±1.061)%、(203.102±29.653)ng/ml和(74.575±6.432)ng/ml, Z值分别为-2.56、-2.24、-2.40、-2.56, P值均<0.05]和Scramble siRNA组[(0.493±0.036)×103/μl、(5.858±0.872)%、(189.964±30.042)ng/ml和(80.935±8.358)ng/ml, Z值分别为-2.17、-2.08、-2.24、-2.72, P值均<0.05], 且鼻黏膜组织中IL-5和Eotaxin-1表达量分别为(312.279±34.281)pg/ml和(25.297±4.323)pg/ml, 也显著低于Vehicle组[(689.667±31.905)pg/ml、(68.278±6.485)pg/ml, Z值分别为-2.73、-2.88, P值均<0.01]和Scramble siRNA组[(661.783±42.094)pg/ml、(63.015±7.416)pg/ml, Z值分别为-2.72、-2.81, P值均<0.01]。STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜组织Eos计数为(29.132±4.163)/HPF, 明显低于Vehicle组[(78.050±7.912)/HPF, Z=-2.88, P<0.01]和Scramble siRNA组[(73.864±8.671)/HPF, Z=-2.72, P<0.01]。STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜组织中STAT6蛋白相对表达水平为0.105±0.021, 与Control、Vehicle及Scramble siRNA组(0.232±0.037、0.243±0.039、0.228±0.032)相比显著降低(Z值分别为-2.25、-2.49、-2.56, P值均<0.05)。与Vehicle组(0.613±0.046)和Scramble siRNA组(0.641±0.050)相比, STAT6 siRNA组p-STAT6蛋白相对水平(0.292±0.038)明显下降(Z值分别为-2.81、-2.88, P值均<0.01)。免疫荧光染色结果显示, p-STAT6主要位于鼻黏膜上皮细胞及炎性细胞的细胞核中, STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜中表达p-STAT6的绿色荧光弱于Vehicle及Scramble siRNA组。结论经鼻滴入STAT6 siRNA可下调鼻黏膜STAT6表达, 降低p-STAT6水平, 抑制ECRS产生。
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单位苏州大学附属第二医院; 苏州大学附属第一医院
