摘要
目的:构建人血管内皮细胞生长因子II型受体(VEGFR2)胞膜外区第三及第四个免疫球蛋白样结构域与GST融合蛋白VEGFR2 D3.4/GST基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化该融合蛋白。方法:由公司合成VEG-FR2胞膜外区第三、第四免疫球蛋白样结构域氨基酸的编码序列,克隆入原核表达载体pGEX-4T1中GST标签的下游,构建重组表达载体pGEX4T-VEGFR2 D3.4,将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达VEGFR2 D3.4/GST融合蛋白,经不同浓度尿素洗脱纯化后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果:SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量(Mr)为46 000,与理论值相符,主要以包含体形式存在;灰度扫描分析融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的38.6%,纯化产物纯度最高为87.1%,Western blot证实该蛋白为VEGFR2 D3.4/GST融合蛋白。结论:利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的包含体形式VEGFR2 D3.4/GST融合蛋白。
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单位第四军医大学