弓形虫GJS株致密颗粒6基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达

作者：张燕丽; 曹丽艳; 芦赟; 蔡志杰; 王艳华; 付宝权; 李文卉; 张德林

来源：中国兽医科学, 2010, (04): 363-367.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2010.04.006

• 刚地弓形虫
• 致密颗粒6
• 基因克隆
• 真核表达 Toxoplasma gondii
• dense granule antigen 6(GRA6)
• gene cloning
• eukaryotic expression

根据GenBank数据库中弓形虫RH株GRA6基因序列设计1对引物,采用PCR技术从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增GRA6基因,导入真核表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO,转化大肠杆菌DH5α,经酶切、PCR及测序鉴定,将重组质粒转染BHK-21细胞。GFP标签证明质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达,通过Western-blot分析,细胞裂解液中有一条约52 ku的条带,可被山羊抗弓形虫超免疫血清识别,大小与预测值相符。表明真核表达质粒pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-GRA6中的GRA6基因在BHK-21细胞中获得表达且表达产物具有抗原性。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所