应用枯草芽孢杆菌表达系统制备肠道病毒71型VP1蛋白

作者：张国良; 刘威龙; 詹森林; 刘映霞; 陈圆圆; 杨桂林; 聂广; 周伯平

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2013, 27(06): 403-405.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2013.06.002

• 肠道病毒属
• 病毒包膜蛋白质类
• 芽孢杆菌,枯草

目的利用枯草芽孢杆菌系统表达肠道病毒71型(EV71)病毒VP1蛋白。方法使用基因特异性引物扩增VP1开放读码框(ORF),构建包含VP1完整开放读码框的pSac-VP1穿梭载体。根据枯草芽孢杆菌表达系统双交叉同源重组的特点,将EV71的结构抗原基因VP1整合在枯草芽孢杆菌sacA染色体,并经测序鉴定。使用VP1特异性抗体,通过蛋白印记(Western-Blot)鉴定枯草芽孢杆菌中VP1蛋白的表达情况。结果成功克隆EV71的VP1基因,长度1361 bp,并将其克隆入穿梭载体pSac-Kan。测序结果显示VP1基因成功整合如sacA染色体。Western-Blot证实VP1抗原在枯草芽孢杆菌的成功表达,相对分子质量约35×103。结论利用枯草芽孢杆菌表达系统成功制备EV71病毒VP1抗原,为后续EV71诊断试剂、疫苗研发奠定基础。

• 单位
  深圳市第三人民医院