染色质体外组装相关蛋白的表达纯化及组装体系的建立

作者：赵忠亮; 赵吉成; 代辉; 沈珝琲; 张业

来源：医学研究杂志, 2012, (01): 19-23.

DOI：10.3969/j.issn.1673-548X.2012.01.007

• 组蛋白
• ACF
• NAP-1
• 染色质组装 Histone
• Chromatin assembly

目的提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuclear assemblyprotein-1)及ACF(ATP-utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系。方法在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测。结果获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋...

• 单位
  中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院; 医学分子生物学国家重点实验室