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摘要
为寻找兽医领域新的干细胞来源,以兔羊膜组织为材料,使用胰蛋白酶对羊膜组织进行消化去除上皮细胞,再使用Ⅰ型胶原酶消化分离培养得到兔羊膜间充干细胞(rabbit amniotic mesenchymal stem cells, rAMSCs)。观察细胞形态和生长规律并绘制出生长良好的P3及P10代rAMSCs生长曲线。经对比发现,P3代生长优于P10代,所以选择P3代进行冻存,探索P3代rAMSCs的冻存及复苏能力。通过免疫荧光鉴定相关干细胞标志蛋白的表达;通过流式细胞术对rAMSCs的细胞表型进行鉴定;通过体外诱导分化鉴定rAMSCs的诱导分化潜能。结果表明:P3代rAMSCs形态为长梭形,增殖性能好,冻存后复苏率高。P3代rAMSCs能够成功表达干细胞标志蛋白OCT4、SOX2和NANOG,低表达细胞表型蛋白CD34、CD45和HLA-DR,高表达细胞表型蛋白CD29、CD49d和CD73,符合MSCs鉴定标准,并在体外诱导条件下能够分化为成脂细胞和成骨细胞。说明酶消化法能够成功获取rAMSCs,并且生物学特性稳定,表达干细胞相关蛋白及表型,具有诱导分化潜能。
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