摘要
目的:通过对琼胶降解菌FG1发酵液的分离纯化,拟获得较高纯度的琼胶酶,并探究其最适反应条件,为后续琼胶酶的工业化生产提供基础.方法:将FG1菌株的发酵液离心后得到粗酶液,再通过超滤浓缩、透析、葡聚糖凝胶柱层析进行酶的分离纯化.通过DNS法测定酶解反应产物还原糖含量从而计算得出酶活力单位,运用单因素实验和正交试验设计对单一琼胶酶组分的酶解反应条件进行优化.结果:经分离纯化紫外检测得到两个峰值产物且均具有琼胶酶活性,分别命名为FG1-A、FG1-B,酶组分A与酶组分B经PAGE电泳分别显示为两条亮带和一条亮带,酶组分A中两种蛋白质分子量分别为53.45 kD和46.85 kD,酶组分B蛋白质分子量为42.50 kD.对单一酶组分B进行反应条件优化得出其最适反应pH为6.4,最适反应温度为37℃,最适反应底物浓度为0.35%.结论:本研究利用葡聚糖凝胶柱对FG1粗酶液纯化了7.65倍,初步探讨了FG1琼胶酶的酶解条件,为最终得到高纯度的琼胶酶奠定理论与实践基础.
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