扁果枸杞表皮蜡质合成相关基因LbCER1的RNAi载体构建

作者：袁惠君^*; 高泽; 王绢绢; 鲍婧婷; 冯再平

来源：食品与发酵工业, 2020, 46(10): 14-18.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023403

• 扁果枸杞
• RNA干扰
• 载体构建
• 醛脱羰基酶
• 表皮蜡质合成

为鉴定醛脱羰基酶(ECERIFERUM1,CER1)基因在旱生植物表皮蜡质烷烃合成过程中的功能,培育适宜干制加工品种,选定扁果枸杞(Lycium barbarum ssp. Bianguo) Lb CER1基因1 469～1 840 bp区段为最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)靶序列,克隆该区段并将其插入p KANNIBAL载体,构建具有发卡状反向重复序列的RNAi中间载体p KANNIBAL-Lb CER1(+)-PDK intron-Lb CER1(-),并将发卡状反向重复序列转入RNAi表达载体p ART27,再用冻融法将p ART27-Lb CER1 (+)-PDK intron-Lb CER1 (-)载体转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) GV3101,并用限制性内切酶双酶切法和PCR法检测转化的农杆菌菌株。结果表明,RNAi的中间载体和表达载体均结构正确,并且RNAi表达载体p ART27-Lb CER1(+)-PDK intron-Lb CER1(-)成功转化根癌农杆菌GV3101,说明该构建方法正确,将为进一步筛选Lb CER1-RNAi植株,获得适宜干制加工的宁夏枸杞新品种奠定基础。

• 单位
  兰州理工大学