第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因人脑胶质瘤SHG44细胞凋亡及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白下调表达

作者：李真; 李伟; 陈恬; 陈琦; 孙锡波; 李炳选^*

来源：中华实验外科杂志, 2016, 33(10): 2351-2353.

• 脑胶质瘤
• 第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因
• 脱噬作用
• B细胞淋巴瘤/白血病-2

目的观察第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)对人脑胶质瘤SHG44细胞凋亡及凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达的影响, 探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法将SHG44细胞常规条件下培养于含10%小牛血清的RPMI 1640培养基中。脂质体介导法将pBP-PTEN和pBP载体分别转染对数生长期的SHG44细胞, 筛选阳性细胞克隆, 将分别成功转染pBP-PTEN和pBP载体的SHG44细胞设为SHG44-pBP-PTEN和SHG44-pBP细胞。利用原位杂交方法分别检测SHG44-pBP-PTEN、SHG44-pBP和SHC-44细胞。通过免疫组织化学方法检测PTEN基因在3种细胞中的表达, 采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG44细胞有PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见SHC-44-pBP-PTEN细胞核染色质浓缩、边集, 细胞核碎裂, 胞质浓缩;并检测到明显的凋亡小体, 为典型的肿瘤细胞凋亡表现。SHG44和SHG44-pBP细胞超微结构未见异常。流式细胞仪示细胞周期从G1期到S期发生抑制, 并且在G1期峰前出现明显的凋亡峰, SHG44细胞G1期、S期、G2期和凋亡(AP)期所占比例分别为61.2%、28.2%、8.3%和2.3%, SHG44-pBP细胞分别为64.1%、24.6%、8.9%和2.4%, SHG44-pBP-PTEN细胞分别为75.3%、9.6%、2.2%和12.9%。SHG44-pBP-PTEN细胞的生长速度较另两组细胞明显降低。细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带;bcl-2的表达也显著下调。SHG44-pBP细胞的平均荧光强度(MIF)为对照细胞的100.4%(P>0.05), 而SHG44-pBP-PTEN细胞的MIF为对照细胞的40.2%, 两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PTEN基因可诱导SHG44细胞凋亡, 并下调bcl-2蛋白的表达, 这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。

• 单位
  潍坊市益都中心医院; 青州市人民医院; 神经内科