耐酸性高温α-淀粉酶突变基因的异源表达及纯化

作者：刘逸寒; 李玉; 田琳; 路福平; 杜连祥

来源：化学与生物工程, 2007, (03): 58-62.

DOI：10.3969/j.issn.1672-5425.2007.03.020

• 耐酸性高温α-淀粉酶突变基因
• 表达
• 纯化
• 酶学性质

将去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a上,实现重组质粒pET-amyd在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。经硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析,重组酶AMYD的比活达到354.6 U.mg-1、纯化倍数为83.83,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测,AMYD酶分子量为63.5 kDa。重组酶AMYD的最适温度80℃、最适反应pH值为4.5,在温度低于90℃、反应pH值4.0~6.5的条件下,酶活较稳定。

• 单位
  生物工程学院; 天津科技大学